谷丙轉(zhuǎn)氨酶（ALT/GPT）測(cè)試盒的測(cè)定原理
（微板法）
一、測(cè)定原理：
谷丙轉(zhuǎn)氨酶（ALT）在 37℃及 PH7.4 條件下，作用于丙
氨酸及α-酮戊二酸組成的底物，生成丙酮酸及谷氨酸。反應(yīng)
30min 后（固定時(shí)間）加入 2,4-二硝基苯肼（DNPH）鹽酸溶
液，既中止反應(yīng)，同時(shí) DNPH 與酮酸中羰基加成，生成丙酮
酸苯腙。苯腙在堿性條件下呈紅棕色，于 505nm 比讀吸光度
并計(jì)算酶活力。
二、試劑的組成與配制：(96T)
試劑一:谷丙轉(zhuǎn)氨酶基質(zhì)液,5mL×1 瓶，4℃冰箱保存 6 個(gè)月；
試劑二:2,4—二硝基苯肼液,5mL×1 瓶，4℃冰箱保存 6 個(gè)月；
試劑三:4mol/L 氫氧化鈉液,5mL×1 瓶，室溫密封保存 6 個(gè)月；
0.4mol/L 氫氧化鈉液的配制,臨用時(shí)按 4mol/L 氫氧化鈉液:雙
蒸水=1∶9 的比例稀釋，需多少配多少，室溫密封保存。
試劑四:2mmol/mL 丙酮酸鈉標(biāo)準(zhǔn)液×1 支，4℃冰箱保存 6 個(gè)月；
試劑五:0.1mol/L 磷酸鹽緩沖液×1 支，4℃冰箱保存 6 個(gè)月。
三、操作過(guò)程：
1、樣本前處理:
①、血清（漿）及其它液體樣本待測(cè)：直接測(cè)定。
②、動(dòng)物組織樣本：準(zhǔn)確稱取組織重量，按重量（g）：體積
(mL)=1:9 的比例，加入 9 倍體積的生理鹽水，冰水浴條件
下機(jī)械勻漿，2500 轉(zhuǎn)/分，離心 10 分鐘，取上清液待測(cè)。
③、培養(yǎng)細(xì)胞樣本前處理：將收集好的細(xì)胞用等滲緩沖液（推
薦 0.1mol/L pH7～7.4 磷酸鹽緩沖液或生理鹽水）清洗 1～
2 次；1000 轉(zhuǎn)/分,離心 10 分鐘,棄上清,留細(xì)胞沉淀，加入勻
漿介質(zhì)（推薦加入 0.1mol/L pH7～7.4 磷酸鹽緩沖液或生
理鹽水），冰水浴條件下超聲破碎或手動(dòng)勻漿，制備好的
勻漿液不離心，待測(cè)。
2、操作表:
1、比色法中常用的有賴氏（Reitman-Frankel）法及金氏（King）
法。賴氏法標(biāo)準(zhǔn)曲線所定單位數(shù)，是用實(shí)驗(yàn)方法和卡門(mén)氏分
光
光度法（速率法）作對(duì)比測(cè)定求得的。以卡門(mén)氏單位報(bào)
告結(jié)果，比較準(zhǔn)確。
卡門(mén)氏單位定義：1mL 液體，反應(yīng)液總?cè)萘?/span> 3mL，波長(zhǎng) 340nm，
1cm 光徑，25℃，1min 內(nèi)所生成的丙酮酸，使 NADH 氧化
成 NAD+而引起吸光度每下降 0.001 為一個(gè)單位（1 卡門(mén)氏
單位=0.482 U/L，25℃）。
2、一般血清標(biāo)本內(nèi)源性酮酸很少，血清對(duì)照孔吸光度值接近試
劑空白孔（以雙蒸水代替血清，其他和對(duì)照孔同樣操作）。
所以，成批標(biāo)本測(cè)定時(shí)，一般不需要每一標(biāo)本都作本身血清
對(duì)照孔，以試劑空白孔代替即可，但對(duì)脂血、黃疸或溶血血
清，每份標(biāo)本應(yīng)作對(duì)照孔。
3、酶活力超過(guò) 150 卡門(mén)氏單位時(shí)，用生理鹽水稀釋血清后重測(cè)。
4、應(yīng)將一般血清的對(duì)照孔（或稱標(biāo)本空白孔）的吸光度作為日
常質(zhì)控的指標(biāo)之一；如相差大，可考慮α-酮戊二酸濃度、DNPH
濃度及儀器等原因引起。
5、血清中 ALT 在室溫（25℃）可保存 2 天，在 0～4℃可保存一
周，在-25℃可保存 1 個(gè)月。
附錄Ⅰ：ALT 標(biāo)準(zhǔn)曲線
1、操作表:
附錄Ⅱ：組織中 ALT 測(cè)定
1、樣本前處理：
準(zhǔn)確稱取組織重量,按重量(g):體積(mL)=1:9 的比例,加入 9 倍體
積的生理鹽水,冰水浴條件下機(jī)械勻漿,制成 10%的組織勻漿,2500
轉(zhuǎn)/分,離心10分鐘,取上清液,再用生理鹽水稀釋到適宜濃度(通過(guò)標(biāo)
準(zhǔn)曲線后計(jì)算得勻漿液卡門(mén)氏單位值小于 150)待測(cè)。(取部分上清
液測(cè)蛋白濃度,蛋白定量試劑盒本所有售)
2、操作表：
組織中 活力= 通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線得 ?待測(cè)勻漿液蛋白
勻漿液ALT活力 濃度
附錄Ⅲ：血清（漿）中 ALT 測(cè)定
1、前處理：
血清(漿)直接取樣進(jìn)行測(cè)定。（若酶活力超過(guò) 150 卡門(mén)氏單位
時(shí)，需用生理鹽水稀釋血清后重新測(cè)定）
2、操作表：
谷丙轉(zhuǎn)氨酶（ALT/GPT）測(cè)試盒的測(cè)定原理
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